細胞生物學實驗報告

時間：2024-05-15 08:45:19 藹媚報告

細胞生物學實驗報告

　　在生活中，大家逐漸認識到報告的重要性，報告具有成文事后性的特點。寫起報告來就毫無頭緒？下面是小編整理的細胞生物學實驗報告，供大家參考借鑒，希望可以幫助到有需要的朋友。

細胞生物學實驗報告

　　細胞生物學實驗報告 1

　　一、實驗目的

　　了解細胞膜的滲透性及各類物質進入細胞的速度

　　二、實驗原理

　　1、在等滲溶液中，細胞對各種溶質的透過性不同。有的溶質可以進入，有的溶質不能滲入。

　　2、滲入的溶質能提高細胞的滲透壓，促進水分子進入細胞，引起溶血現象。

　　3、不同的溶質滲入到細胞內的速度不同，因此溶血時間也不同。

　　三、實驗材料

　　新鮮血液（雞血、豬血、牛血等）

　　四、實驗器材

　　試管（1.5cmX18cm）、試管架、10ml移液管、1ml移液管、200ml燒杯（2個）、250ml容量瓶、移液槍、膠頭滴管、菜刀、吸球、電子天平、顯微鏡、蓋玻片、載玻片、秒表

　　五、實驗藥品及試劑

　　0.17MNaCl、0.17MNH4Cl、0.17MNH4Ac、0.17MNaNO3、0.12MNa2SO4、0.12M草酸銨、0.32M葡萄糖、0.32M甘油、0.32M乙醇、0.32M丙酮、肝素抗凝劑

　　六、實驗步驟

　　1、制備血液稀釋液

　　（1）抗凝劑的制備：首先稱取1克肝素鈉粉末，然后加入0.17MNaCl溶液10ml（1∶10的比例），混合均勻，制成肝素抗凝劑。

　　（2）血液稀釋液的制備：取新鮮血液，按比例（肝素抗凝劑:血液=1∶10）混合均勻，配制成經肝素抗凝的血液。

　　（3）按比例（經肝素抗凝的血液∶0.17MNaCl溶液=1∶10）混合均勻，形成一種不透明的紅色液體。

　　2、低滲溶液（空白對照）的觀察

　　取試管一只，加入10ml蒸餾水，然后再加入1ml稀釋的血液。注意觀察溶液顏色的變化。結果是溶液由不透明的紅色變為澄清。記錄下這個過程所要的時間。

　　3、紅血球的滲透性

　　按表一的配制，分別在下列十種等滲溶液中進行實驗。輕輕搖動，注意有無顏色變化，是否有溶血現象發生，記下時間（自加入稀釋血液到溶液逐漸由紅色變為透明澄清，紅血球全部溶血所需時間），填入表一的空格中。

　　4、顯微觀察

　　何為細胞膜？注意：這一步，動作要非常迅速，否則雞血會凝固。或者先把抗凝劑加入到燒杯中，再加入新鮮的雞血，邊加邊震蕩即可。為何不同物質進入細胞的速度不同？為什么新鮮的雞血會凝固？何為溶血現象？為什么這一步要使用0.17M的NaCl溶液？你知道有哪些血液抗凝劑？

　　（1）血液紅細胞的'觀察

　　滴一滴稀釋的血液于載玻片上，蓋上蓋玻片。用光學顯微鏡觀察細胞的種類、形狀和顏色。

　　（2）細胞破碎的觀察

　　在上一步的載玻片的一端滴加清水，在另一端吸水，并在顯微鏡下觀察細胞的破裂。

　　七、實驗結果與分析

　　1、比較和分析你所觀察到的實驗結果，并解釋原因。

　　結果：

　　（1）在所提供的試劑中不溶血的有：

　　（2）在所提供的試劑中不完全溶血的有：

　　（3）在所提供的試劑中完全溶血的有：

　　結果分析與比較：結論：

　　2、繪制你所觀察到的血液細胞圖。

　　3、討論溶血實驗在研究中應用的可能性。

　　細胞生物學實驗報告 2

　　一、實驗目的：

　　1、掌握顯示細胞中過氧化物酶反應的原理和方法。

　　2、了解細胞凋亡的生物學意義

　　3、掌握凋亡細胞的形態學檢測方法

　　二、實驗原理：

　　1、細胞內的過氧化物酶能把許多胺類氧化為有色化合物，用聯苯胺處理標本，細胞內的過氧化物酶能把聯苯胺氧化為藍色的聯苯胺藍，進而變為棕色產物，因而可以根據顏色反應來判定過氧化物酶的有無或多少。中間產物藍色聯苯胺是不穩定的，無需酶的參加即可氧化為棕色化合物。

　　2、細胞凋亡是指細胞在生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結束其生命的過程。它是一個主動的、高度有序的，基因控制的，一系列酶參與的過程。

　　3、凋亡細胞形態學特征是:體積變小,細胞質濃縮;細胞核發生染色質凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內陷形成大小不同的凋亡小體;根據細胞凋亡形態學特征進行顯微觀察是檢測細胞凋亡的一種直觀、可靠的方法。

　　三、實驗步驟：

　　細胞中過氧化物酶的顯示

　　1、在載片上滴一滴PBS緩沖液；

　　2、取骨髓細胞：用斷頸法處死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剝出后肢股骨，剪開股骨一端，用牙簽尖的`一端插入剪開的小孔中，摳取少許骨髓細胞置滴有PBS的載片上；

　　3、涂片：用另一玻片將骨髓細胞沿一個方向涂布推開，室溫晾干；

　　4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸銅液，以蓋滿涂片為宜，處理30秒-1分鐘。

　　5、傾去硫酸銅液，直接滴入聯苯胺混合液反應6分鐘（以蓋滿涂片為宜）

　　6、清水沖洗，番紅復染2min。

　　7、鏡檢：清水沖洗，室溫晾干，先低倍鏡下觀察，后換高倍鏡下觀察（油鏡100x）

　　細胞凋亡的形態學檢測與觀察吉姆薩染色:

　　1、取細胞爬片置于小培養皿中(有細胞面朝上)

　　2、生理鹽水輕輕漂洗細胞

　　3、95%乙醇固定5min

　　4、PBS緩沖液洗2次

　　5、吉姆薩染色液染色5min

　　6、蒸餾水輕輕洗去染液

　　7、普通光學顯微鏡下觀察。

　　吖啶橙染色:

　　1、取細胞爬片置于小培養皿中(有細胞面朝上)

　　2、生理鹽水輕輕漂洗細胞

　　3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min

　　4、PBS緩沖液洗2次每次1min

　　5、0.01%吖啶橙染色液在避光環境下染色5min6、蒸餾水輕輕洗去染液

　　6、選用藍光激發濾片在熒光顯微鏡下觀察。

　　四、結果與分析：

　　根據隨機選擇的幾個視野的統計，該樣品的細胞凋亡率=227/506x100=44.9

　　Hela細胞凋亡過程中核染色質的形態變化（吖啶橙染色）

　　五、思考題：

　　1、細胞凋亡的調控機制

　　細胞凋亡是一個受基因調控、眾多細胞膜受體和胞漿蛋白參與的細胞主動自殺過程，其觸發因素多種多樣，包括細胞內誘導因子和抑制因子對細胞凋亡的調控。

　　2、細胞凋亡的特征

　　凋亡細胞形態學特征是:體積變小,細胞質濃縮;細胞核發生染色質凝聚和聚集于核膜周圍(邊緣化);細胞膜有小泡狀形成;晚期細胞膜內陷形成大小不同的凋亡小體。

　　3、研究細胞凋亡的方法

　　定性的研究方法：常規瓊脂糖凝膠電泳、脈沖場倒轉瓊脂糖凝膠電泳、形態學觀察（普通光學顯微鏡、透射電鏡、熒光顯微鏡）

　　定量或半定量的研究方法：各種流式細胞儀方法、原位末端標記法、ELISA定量瓊脂糖凝膠電泳。

　　細胞生物學實驗報告 3

　　一、實驗目的：

　　1、通過對原核和真核各種形態細胞的光學顯微鏡觀察，了解細胞的形態及其顯微結構；

　　2、學習顯微測量的方法，對細胞的大小有一直觀認識。

　　二、實驗材料和儀器：

　　小白鼠肝細胞切片；雞血紅細胞；蠶豆葉片橫切片；

　　普通光學顯微鏡；目鏡測微尺；鏡臺測微尺；載玻片；蓋玻片。

　　三、實驗步驟：

　　(一)細胞形態觀察

　　l、動物細胞的觀察

　　（1）人肝細胞切片：在顯微鏡下仔細觀察肝細胞的形態構造。

　　（2）雞血細胞涂片的'觀察：觀察血細胞的組成；紅細胞、白細胞、血小板的形態特點。

　　2、植物細胞的觀察

　　取蠶豆葉片橫切片的觀察：注意表皮細胞和葉肉細胞的基本結構。

　　（二）細胞的大小和測量

　　1、卸下目鏡的上透鏡，將目鏡測微尺刻度向下裝在目鏡的焦平面上，再旋上目鏡的上透鏡。

　　2、將鏡臺測微尺刻度向上放在鏡臺上夾好，使測微尺分度位于視野中央。調焦至能看清鏡臺測微尺的分度。

　　3、小心移動鏡臺測微尺和轉動目鏡測微尺(如目鏡測微尺分度模糊，可轉動目鏡上透鏡進行調焦)，使兩尺左邊的一直線重合，然后由左向右找出兩尺另一次重合的直線。

　　4、記錄兩條重合線間目鏡測微尺和鏡臺測微尺的格數。按下式計算目鏡測微尺每格等于多少μm：

　　鏡臺測微尺的格數=目鏡測微尺每格的微米數x 10/目鏡測微尺的格數

　　四、實驗結果：

　　1、目鏡校正：40倍顯微鏡目鏡測微尺每格的微米數=17/70=0.24

　　2、細胞大小的測量：

　　五、作業與思考：

　　1、血細胞按含量高低，主要含有：紅細胞，白細胞，血小板。

　　白細胞最大，紅細胞次之，血小板最小。紅細胞：主要的功能是運送氧。白細胞：主要扮演了免疫的角色，當病菌侵入人體時，白細胞能穿過毛細血管壁，集中到病菌入侵部位，將病菌包圍，吞噬。血小板：止血過程中起著重要作用。細胞形態見下圖。

　　2、植物細胞一般比動物細胞大一些。形態圖見下。

　　3、在不同放大倍數下，測定的細胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍數越大，在視野中同等實際距離下的兩點視野距離更大，而更容易測量準確。

　　細胞生物學實驗報告 4

　　實驗目的

　　1、學習并掌握動物細胞培養的無菌操作技術。

　　2、了解原代細胞培養的基本方法及操作過程。

　　3、學習細胞計數及營養液的配制。

　　實驗原理

　　1、細胞原代培養

　　原代細胞培養是指直接從動物體內獲取的細胞、組織和器官，經體外培養后，直到第一次傳代為止。這種培養，首先用無菌操作的方法，從動物體內取出所需的組織（或器官），經消化，分解成單個游離細胞，在人工培養下，使其不斷的生長及繁殖。

　　細胞培養是一種操作繁瑣而又要求十分嚴謹的實驗技術。要使細胞能在體外長期生長，必須滿足兩個基本要求：一是供給細胞存活所必須的條件，如適量的水、無機鹽、氨基酸、維生素、葡萄糖及其有關的生長因子、氧氣、適宜的溫度，注意外環境酸堿度與滲透壓的調節。二是嚴格控制無菌條件。

　　2、細胞死活鑒定死活細胞的鑒定方法有很多種，常用的有染色法和儀器分析法。染色法是常用的細胞死活鑒定方法，簡便，易于操作。不同的死活細胞鑒定方法有各自不同具體的反應機理，但無論采用何種辦法，都是利用了死活細胞在生理機能和性質上的.差異。

　　染色法分化學染色法和熒光染色法，根據染色機理的不同，染料或使死細胞著色，或使活細胞著色。

　　死活細胞在生理機能和性質上的差異主要包括：

　　死活細胞細胞膜通透性的差異：活細胞的細胞膜是一種選擇性膜，對細胞起保護和屏障作用，只允許物質選擇性的通過；而細胞死亡之后，細胞膜受損，通透性增加。常用的以臺盼藍鑒別細胞死活的方法就是利用了這一性質。臺盼藍，又稱錐藍，是一種陰離子型染料，不能透過完整的細胞膜。所以經臺盼藍染色后只能使死細胞著色，而活細胞不被著色。甲基藍有類似的染色機理。植物細胞的質壁分離也可鑒定死活。

　　死活細胞在代謝上的差異：是采用美藍染料鑒定酵母細胞死活的依據。美藍是一種無毒染料，氧化型為藍色，還原型為無色。由于活細胞中新陳代謝的作用，使細胞內具有較強的還原能力，能使美藍從藍色的氧化性變為無色的還原型，因此美藍染色后活的酵母細胞無色；而死細胞或代謝緩慢的老細胞，則因它們的無還原能力或還原能力極弱，使美藍處于氧化態，從而被染成藍色或淡藍色。

　　除此之外，還有一些細胞器的專有染料。如液泡系的專有染料中性紅。中性紅是一種低毒性染料，可以使活細胞液泡著紅色，而細胞質和細胞核不被著色；死細胞的液泡不被著色或淺染，染料彌散于整個細胞中，細胞核和細胞質被染成紅色。有時侯為了增加染色效果可以將兩種染料結合使用，如甲基藍-中性紅混合染色法。

　　實驗用品

　　1、材料小白鼠

　　2、試劑

　　臺盼藍、伊紅、PBS緩沖液、細胞培養液（含生長因子）

　　3、器材

　　剪子、棉球、75%酒精、移液槍、無菌操作臺、正置光學顯微鏡、倒置光學顯微鏡、解剖盤、滴管、離心管、離心機、注射器、Eppendorf管、培養皿、酒精燈、塑料培養皿、載玻片、蓋玻片、血細胞計數板

　　實驗步驟

　　1、取材

　　取小鼠一只，采用斷頭法處死。清水洗小鼠浸入75%酒精中消毒3min，取出轉入超凈工作臺內的解剖盤中，無菌操作打開腹腔，取出其脾臟，除去其周圍的脂肪組織，并用PBS液自上而下淋洗1-2次，轉入無菌培養皿中待用。

　　2、分離脾細胞

　　用滴管向培養皿中注入30滴PBS緩沖液，再用“L”型針頭注射器在皿中吸取0.2毫升PBS液注入脾臟，注射時沿長軸注射。然后再用針頭在脾臟上扎眼，并用“L”型針頭輕輕刮出脾細胞。在均勻吹勻脾臟細胞。

　　吸取上述分離的單個脾細胞懸液，放入Eppendorf管中，使量至1mL，以1000r/min離心5min。3培養脾細胞

　　取塑料培養皿一套，用移液槍吸取培養液2mL加入塑料皿中，并將皿標記待用。取離心后的Eppendorf管，棄去上清液，用移液槍（200ul）吸取塑料皿中的培養液400ul加入棄去上清的Eppendorf管中，用槍頭吹勻管底的脾細胞，吸取200ul脾細胞懸液接種于上述塑料皿中，混勻后放入37°C，5%CO2的培養箱中培養。

　　4、配制染液

　　用生理鹽水配成5%臺盼藍染液，備用。

　　5、染色

　　取0.5mL細胞懸濁液放入試管中，加入1-2滴染液。混合。2-5min后將細胞放在血細胞計數板上觀察死活情況，注意不要有

　　氣泡產生，放大倍數為10x10。染色后活細胞不著色，死細胞顯示藍色。注意染色時間不能超過15min，否則染液將細胞毒殺。

　　6、計數

　　在10x10倍的顯微鏡下觀察，計算血細胞計數板的4個4小方格的細胞數量。包括細胞總數與死細胞數量。壓線者計上不計下，計左不計右。

　　7、計算細胞活力

　　根據公式：細胞活力=(總細胞數-死細胞數)/總細胞數x100%

　　實驗結果

　　臺盼藍染色后的細胞（10x10）伊紅染色后的細胞（10x10）

　　總細胞數和活細胞數統計表（10x10）